Цель теста Молиша, принцип, процедура, результат

Это тест, который является общим для всех углеводов, больших, чем тетрозы. Тест основан на том, что пентозы, так же как и гексозы, могут быть обезвожены с использованием конц. серной кислоты, в результате чего получают фурфурол, или гидроксиметилфурфурол, или гидроксиметилфурфурол. Эти соединения конденсируются с α-нафтолом с образованием пурпурного продукта конденсации.

Тест Молиша — это тип химического теста, который можно использовать для определения содержания углеводов в данном образце. Проба Молиша названа в честь чехо-австрийского ботаника Ганса Молиша, который признан ее открывшим. Проба Молиша основана на добавлении к реактиву Молиша (раствор – нафтола и алкоголь) в тестируемом аналите. Затем к смеси добавляют небольшое количество концентрированной H2SO4 (серной кислоты).

Появление пурпурного или красно-фиолетового кольца на границе H2SO4, аналита и смеси реагентов Молиша подтверждает присутствие углеводов в аналитическом образце.

Цели теста Молиша

• Для определения содержания углеводов в конкретном образце.
• Дифференцировать углеводы и другие биомолекулы.

Принцип теста Молиша

В эксперименте Молиша углеводы (если они присутствуют) обезвоживаются при введении концентрированной соляной или серной кислоты, что приводит к образованию альдегида. Этот альдегид подвергается конденсации с -нафтолом в реагенте. Это приводит к образованию комплекса пурпурного или красновато-фиолетового цвета.

Тестовая реакция Молиша

Моносахариды, дисахариды и полисахариды (кроме триоз и тетроз) будут давать положительную реакцию, а гликопротеины и нуклеиновые кислоты дают положительную реакцию, так как все эти соединения гидролизуются в моносахариды сильными минеральными кислотами. Затем пентозы дегидратируются до фурфурола, а гексозы дегидратируются до 5-гидроксиметилфурфурола. Любой из этих альдегидов, если он присутствует, будет конденсироваться с 2 молекулами α-нафтола и давать соединение пурпурного цвета, как показано в примере с глюкозой:

Требования

реактив

• Реактив Молиша: Растворите 3.75 грамма альфа-нафтола в 25 миллилитрах раствора. Спирт этиловый 99.99%. Этот конкретный реагент необходимо готовить в свежем виде.
• Концентрированная серная кислота
• Проба

• Пробирки
• Подставка для пробирок
• пипетка
• Дистиллированная вода

Процедура теста Молиша

1. Налейте по 2 мл дистиллированной воды и испытайте растворы сахаров в четырех пробирках подряд.
2. По две капли реагента Молиша в каждую пробирку.
3. Поместите пробирку в наклонное положение и медленно добавьте внутрь пробирки 1 мл концентрированной H2SO4.
4. Не смешивайте кислоту и раствор.
5. Если концентрированную кислоту не добавлять постепенно, может образоваться черное кольцо, потому что тепло, выделяющееся в результате реакции, может вызвать обугливание углеводов.
6. Проверьте пробирку, чтобы увидеть появление круга фиолетового цвета в слое между кислотой и раствором.

Наблюдения

Кольцо фиолетового цвета образуется на пересечении двух жидкостей, т. е. раствора реагента Молиша и серной кислоты.

Интерпретация результатов теста Молиша

Моносахариды, дисахариды, полисахариды и дисахариды (кроме триоз и тетроз), скорее всего, вызовут положительную реакцию. Подобным образом, гликопротеины и нуклеиновые кислоты также вызывают положительные реакции, так как все эти соединения гидролизуются в моносахариды сильными минеральными кислотами. Затем пентозы дегидратируются до фурфурола, а гексозы дегидратируются до 5-гидроксиметилфурфурола. Один или оба этих альдегида, если они присутствуют, будут объединяться путем объединения двух молекул нафтола с образованием продукта с фиолетовым оттенком.

Отрицательный тест (слева) и положительный тест (справа) | Источник: http://dept.harpercollege.edu/chemistry/chm/100/dgodambe/thedisk/food/molisch/molisch.htm

• Положительный результат: Если испытуемый раствор образует слои фиолетового или пурпурно-красного цвета, это указывает на наличие углеводов. Следовательно, тестируемый образец оказался положительным в тесте Молиша. Молиш тест.
• Отрицательный результат: Если испытуемый раствор не создает фиолетовых или пурпурно-красных цветовых слоев, это указывает на то, что в испытуемом растворе нет молекул углеводов. Следовательно, тестовый образец не проходит этот тест Молиша.

Что нужно держать в голове

• Чтобы тест считался успешным, углевод должен содержать не менее пяти атомов углерода. (Это потому, что это результат производных фурфурола, содержащих 5 атомов углерода.)
• Примеси в реагенте окрашиваются в зеленый цвет, что указывает на ложноотрицательный результат теста.
• Олигосахариды и полисахариды сначала распадаются на моносахариды с помощью кислоты, что дает положительный результат теста Молиша.
• Белки высокопоставленных липиды с присоединенным углеводом, тест может дать положительный результат.

Меры предосторожности

• Не добавляйте слишком много реагента Молиша.
• Не наливайте серную кислоту непосредственно в раствор. В противном случае может произойти обугливание углеводов с образованием кольца черного цвета, что даст неточный отрицательный результат теста.
• Налейте кислоту в пробирку, капнув ее внутрь пробирки. Кислота не сможет реагировать быстро, и весь процесс остается гладким и легким.
• Будьте осторожны при работе с сильными кислотами, потому что они могут быть очень вредными для кожи.
• Не трогайте фиолетово-красно-красное кольцо после того, как оно сформировалось, так как кольцо встряхивается и разрушается.

Приложения теста Молиша

• Тест Молиша может быть основным тестом, который необходимо выполнить, когда нужно выяснить, существуют ли молекулы углеводов в образце или нет.
• Molisch используется для идентификации сахаров, таких как манноза, фруктоза, глюкоза и многих других.
• Тесты Молиша можно использовать для идентификации всех видов сахаров, таких как трисахариды, дисахариды, моносахариды и полисахариды. Если вы хотите оценить какой-либо продукт, не содержащий сахара, вы можете протестировать его с помощью этого теста Молиша.
• Помимо углеводов Помимо углеводов, тест Молиша можно использовать для проверки присутствия различных других веществ, таких как гликопротеины и нуклеиновые кислоты.

Ограничения теста Молиша

Поскольку тест Молиша был описан ранее как наиболее важный тест, который используется для идентификации любых сахаров в анализируемом веществе. Но у теста есть проблема.

• Однако, в то время как все моносахариды и трисахариды и полисахариды дисахаридов положительны для теста Молиша, есть несколько исключений. Сахара тризе и тетрозы не реагируют с тестом Молиша. Следовательно, даже если образец содержит все триозы и тетрозы, тест даст отрицательный результат.

Рекомендации

• Тивари А. (2015). Практическая биохимия. LAP Lambert Academic Publishing.
• https://www.researchgate.net/profile/Anand_Tiwari_Phd/publication/313745155_Practical_Biochemistry_A_Student_Companion/links/58ab15f04585150402034e42/Practical-Biochemistry-A-Student-Companion.pdf
• https://en.wikipedia.org/wiki/Molisch%27s_test
• https://jaypeedigital.com/eReader/chapter/9789350251416/ch1
• https://alevelbiology.co.uk/notes/tests-for-carbohydrates/#1-molisch%E2%80%99s-test
• https://www.mlsu.ac.in/econtents/776_Molisch%E2%80%99s%20Test.pdf
• https://www.aakash.ac.in/important-concepts/chemistry/molischs-test
• https://www.vedantu.com/chemistry/molisch-test
• http://dept.harpercollege.edu/chemistry/chm/100/dgodambe/thedisk/carbo/molisch/molisch.htm
• https://www.mcconline.org.in/download/lab_manual/28.pdf

Реакция Молиша

Молиш реакция или тест – альфа-нафтол является химической реакцией , которая демонстрирует наличие в растворе всех углеводов (углеводы) , такие как подсластители молекулы , в частности , ( операционки и diholosides ).

Он заключается в смешивании исследуемого вещества с реактивом Молиша, α-нафтолом . Если реакция положительная, добавление серной кислоты дает пурпурно-красный цвет.

Реакция

Все углеводы – моносахариды , дисахариды и полисахариды – обычно вступают в реакцию с этой реакцией. Это также относится к нуклеиновым кислотам и гликопротеинам, поскольку эти соединения могут гидролизоваться до моносахаридов сильными минеральными кислотами. В пентозах дегидратируют до фурфурола , в то время как гексозы обезвожены 5- оксиметилфурфурол . Эти альдегиды, если они присутствуют, затем конденсируются с двумя молекулами нафтола с образованием соединения пурпурного цвета. Ниже приведен пример реакции глюкозы :